Resumo O COVID-19 é causado pelo vírus SARS-CoV-2, sendo o primeiro caso relatado na China em dezembro de 2019. O vírus se espalhou pelo mundo, levando a Organização Mundial da Saúde a declarar uma pandemia. As estimativas do número de casos de COVID-19 não refletem sua magnitude real, pois os testes são limitados em muitos países. Dados populacionais sobre a proporção da população com anticorpos são relevantes para o planejamento de políticas públicas de saúde. Nosso objetivo é avaliar a prevalência de anticorpos SARS-CoV-2, a presença de sinais e de sintomas de COVID-19 e a adesão a medidas de isolamento. Uma amostra aleatória composta por 133 cidades sentinelas de todos os estados do país será selecionada. Serão realizados três levantamentos sorológicos, com três semanas de intervalo. Em cada cidade, serão selecionados 25 setores censitários e 10 famílias serão amostradas aleatoriamente em cada setor. Em cada domicílio, um habitante será selecionado aleatoriamente para ser entrevistado e testado para anticorpos contra SARS-CoV-2, usando o Teste de Anticorpo WONDFO SARS-CoV-2, que foi validado antes do trabalho de campo. Ao avaliar uma amostra representativa dos locais sentinela ao longo do tempo, este estudo fornecerá informações essenciais para o desenho de políticas de saúde.

Abstract The first case of COVID-19 was reported in China in December 2019, and, as the virus has spread worldwide, the World Health Organization declared it a pandemic. Estimates on the number of COVID-19 cases do not reflect it real magnitude as testing is limited. Population based data on the proportion of the population with antibodies is relevant for planning public health policies. We aim to assess the prevalence of SARS-CoV-2 antibodies, presence of signs and symptoms of COVID-19, and adherence to isolation measures. A random sample comprising 133 sentinel cities from all states of the country will be selected. Three serological surveys, three weeks apart, will be conducted. The most populous municipality in each intermediate region of the country, defined by the Brazilian Institute of Geography and Statistics, was chosen as sentinel city. In each city, 25 census tracts will be selected, and 10 households will be systematically sampled in each tract, totaling 33,250 participants. In each household, one inhabitant will be randomly selected to be interviewed and tested for antibodies against SARS-CoV-2, using WONDFO SARS-CoV-2 Antibody Test. By evaluating a representative sample of Brazilian sentinel sites, this study will provide essential information for the design of health policies.

Resumo O COVID-19 é causado pelo vírus SARS-CoV-2, sendo o primeiro caso relatado na China em dezembro de 2019. O vírus se espalhou pelo mundo, levando a Organização Mundial da Saúde a declarar uma pandemia. As estimativas do número de casos de COVID-19 não refletem sua magnitude real, pois os testes são limitados em muitos países. Dados populacionais sobre a proporção da população com anticorpos são relevantes para o planejamento de políticas públicas de saúde. Nosso objetivo é avaliar a prevalência de anticorpos SARS-CoV-2, a presença de sinais e de sintomas de COVID-19 e a adesão a medidas de isolamento. Uma amostra aleatória composta por 133 cidades sentinelas de todos os estados do país será selecionada. Serão realizados três levantamentos sorológicos, com três semanas de intervalo. Em cada cidade, serão selecionados 25 setores censitários e 10 famílias serão amostradas aleatoriamente em cada setor. Em cada domicílio, um habitante será selecionado aleatoriamente para ser entrevistado e testado para anticorpos contra SARS-CoV-2, usando o Teste de Anticorpo WONDFO SARS-CoV-2, que foi validado antes do trabalho de campo. Ao avaliar uma amostra representativa dos locais sentinela ao longo do tempo, este estudo fornecerá informações essenciais para o desenho de políticas de saúde.

Abstract The first case of COVID-19 was reported in China in December 2019, and, as the virus has spread worldwide, the World Health Organization declared it a pandemic. Estimates on the number of COVID-19 cases do not reflect it real magnitude as testing is limited. Population based data on the proportion of the population with antibodies is relevant for planning public health policies. We aim to assess the prevalence of SARS-CoV-2 antibodies, presence of signs and symptoms of COVID-19, and adherence to isolation measures. A random sample comprising 133 sentinel cities from all states of the country will be selected. Three serological surveys, three weeks apart, will be conducted. The most populous municipality in each intermediate region of the country, defined by the Brazilian Institute of Geography and Statistics, was chosen as sentinel city. In each city, 25 census tracts will be selected, and 10 households will be systematically sampled in each tract, totaling 33,250 participants. In each household, one inhabitant will be randomly selected to be interviewed and tested for antibodies against SARS-CoV-2, using WONDFO SARS-CoV-2 Antibody Test. By evaluating a representative sample of Brazilian sentinel sites, this study will provide essential information for the design of health policies.

The production of recombinant LipL32 protein using Escherichia coli has been used extensively for the development of vaccines and diagnostic tests for leptospirosis. However, E. coli has demonstrated limitations, including low yield and lack of post-translational modifications. In this study, rLipL32 was produced in eukaryotic expression system (Pichia pastoris) and evaluated the antigen by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The yield obtained from the culture supernatant reached 270 mg/L and ELISA showed an accuracy of 95.34%. In summary, the production of rLipL32 using P. pastoris did not impair the antigenic characteristics of this antigen and ensured its use for detecting the leptospiral antibodies in swine sera.

We analyzed mtDNA control region sequences of green turtles (Chelonia mydas) from Arvoredo Island, a foraging ground in southern Brazil, and identified eight haplotypes. Of these, CM-A8 (64%) and CM-A5 (22%) were dominant, the remainder presenting low frequencies (< 5%). Haplotype (h) and nucleotide ( π) diversities were 0.5570 ± 0.0697 and 0.0021 ± 0.0016, respectively. Exact tests of differentiation and AMOVA ΦST pairwise values between the study area and eight other Atlantic foraging grounds revealed significant differences in most areas, except Ubatuba and Rocas/Noronha, in Brazil (p > 0.05). Mixed Stock Analysis, incorporating eleven Atlantic and one Mediterranean rookery as possible sources of individuals, indicated Ascension and Aves islands as the main contributing stocks to the Arvoredo aggregation (68.01% and 22.96%, respectively). These results demonstrate the extensive relationships between Arvoredo Island and other Atlantic foraging and breeding areas. Such an understanding provides a framework for establishing adequate management and conservation strategies for this endangered species.

Amostras de soro sanguíneo, rim, fígado e trato genital de 137 fêmeas suínas (40 matrizes e 97 marrãs) e de urina de 22 matrizes foram colhidas em abatedouro no Estado de São Paulo, no período de abril de 2003 a agosto de 2004 tendo como objetivo o isolamento de Leptospira spp. Quatro estirpes foram isoladas de animais que apresentaram títulos, no teste de soroaglutinação microscópica (SAM) > 100, para o sorovar Pomona e de um animal, não reagente na SAM, em que houve isolamento de leptospiras do fígado e aparelho reprodutor. A presença do DNA de leptospira foi investigada pela técnica da PCR e foram observados resultados positivos nos rins de 11 fêmeas, no fígado de duas, no aparelho reprodutor de duas e na urina de uma delas. Nefrose, nefrite intersticial multifocal variando de moderada a severa, cilindros hialinos e focos hemorrágicos, congestão hepática e de cornos uterinos foram lesões histológicas evidenciadas com freqüência mais alta em animais positivos para leptospira. A impregnação argêntica (Warthin Starry) confirmou a presença de espiroquetas nos túbulos renais das quatro fêmeas onde houve cultura positiva para leptospiras dos rins. O sorogrupo dos cinco isolados foi identificado como Pomona pela técnica de aglutinação cruzada com anticorpos policlonais de referência. A caracterização molecular dos isolados foi realizada pela análise do número variável de repetições em tandem (VNTR). Os mesmos revelaram um padrão distinto da estirpe padrão de L. interrogans sorovar Pomona, porém idêntico a um padrão previamente identificado em estirpes isoladas na Argentina, pertencentes ao sorovar Pomona.

With the aim of isolating Leptospira spp., blood serum, kidney, liver and genital tract of 137 female swine (40 sows and 97 gilts) and also urine samples from 22 sows were collected in a slaughterhouse in the State of São Paulo, from April 2003 to August 2004. Four isolates were obtained from animals that presented microagglutination test (MAT) titers > 100 for the serovar Pomona and one was obtained from an animal negative by MAT in which Leptospira was isolated from the liver and reproductive tract. The presence of leptospiral DNA was investigated by PCR, and positive results were found in kidneys of 11 females, liver of two, genital tract of two and urine of one of them. Nephrosis, interstitial multifocal nephritis, moderate to severe changing, hyalines cylinders and hemorrhagic focuses, hepatic and uterine horns congestion were histological lesions observed in higher frequency in animals positive for leptospira. The silver impregnation (Warthin Starry) confirmed the presence of spirochetes in renal tubules of four females with positive leptospira cultures from kidneys. The serogroup of the five isolates was identified as Pomona by cross agglutination with reference polyclonal antibodies. Molecular characterization of the isolates was carried out by variable-number tandem-repeats analysis. All the isolates revealed a pattern distinct from the L. interrogans Pomona type strain, but identical to a previously identified pattern from strains isolated in Argentina belonging to serovar Pomona.

No sistema de PIV em bovinos, tem sido obtida uma elevada porcentagem de embriões machos. Este experimento foi realizado para determinar se a presença de glicose no meio de cultivo afeta a proporção macho:fêmea (M:F) dos embriões bovinos PIV a partir da FIV com espermatozóides preparados pelos métodos do swim-up (S) ou do gradiente de Percoll (P). Após a MIV, os COCs foram divididos em dois grupos e inseminados com espermatozóides preparados por um dos métodos. Os zigotos foram cultivados em meio com ou sem 5,56mM de glicose, totalizando 4 tratamentos: S-Gli, S+Gli, P-Gli e P+Gli e 48h após a inseminação, os embriões de cada tratamento foram submetidos à sexagem por PCR (n=845). O efeito da glicose no meio de cultivo sobre a proporção M:F dos embriões PIV a partir dos dois métodos foi semelhante (teste do c²), resultando em uma porcentagem de machos menor do que 50% no estágio de 2-C (S: 30,8%; P: 23,8%: P<0,01) e maior do que 50% no estágio de 8-C (S: 79,4%; P: 68,8%: P<0,01). Estas porcentagens foram diferentes (P<0,05) das observadas quando os embriões foram cultivados sem glicose, tanto no estágio de 2-C (S: 48,5%; P: 41,5%) como no de 8-C (S: 62,5%; P: 50,8%). A presença de glicose não afetou a proporção M:F no total de embriões produzidos (S: 56,7%; P: 49,0%), que foi semelhante à observada na ausência de glicose (S: 55,7%; P: 46,2%). Portanto, a glicose exacerbou a diferença na velocidade de desenvolvimento entre os embriões machos e fêmeas.

In the bovine IVP system, it has been obtained a high percentage of male embryos. This experiment was carried ou to determine if the glucose presence in the culture medium affects the sex ratio of bovine embryos IVP from the IVF with spermatozoa prepared for the swim-up (S) or Percoll gradient (P) methods. After the IVM, the COCs had been divided in two groups and inseminated with spermatozoa prepared for one of the methods. The zygotes had been cultivated in medium with or without 5.56mM of glucose, totalizing 4 treatments: S-Glu, S+Glu, P-Glu and P+Glu, and 48h post-insemination, the embryos of each treatment had been sexed for the PCR method (n=845). The effect of glucose in the culture medium on sex ratio of embryos IVP from the two methods was similar (c² test), resulting in a percentage of males lower than 50% in the 2-C stage (S: 30.8%; P: 23.8%: P<0.01) and higher than 50% in the 8-C stage (S: 79.4%; P: 68.8%: P<0.01). These percentages were different (P<0.05) of the observed when the embryos were cultivated without glucose, as much in the 2-C stage (S: 48.5%; P: 41.5%) as in the 8-C stage (S: 62.5%; P: 50.8%). The glucose presence did not affect the sex ratio in the total of produced embryos (S: 56.7%; P: 49.0%), that was similar to the observed in the glucose absence (S: 55.7%; P: 46.2%). Therefore, the glucose exacerbated the difference in the development speed between the female and male embryos.

A diarréia neonatal em suínos causada por Escherichia coli produtora de enterotoxinas (ETEC) é responsável por alta mortalidade e baixa taxa de crescimento de leitões. A habilidade de tais cepas causar doença é dependente principalmente da capacidade de E. coli aderir-se a mucosa do intestino delgado, que é mediada por fímbrias. Neste estudo o gene faeC, que codifica a subunidade menor da fímbria de E. coli K88ab, foi clonado no vetor de expressão em eucariotos pcDNA3, associado ou não à seqüência de KozaK. DNA plasmidial das duas versões da vacina foi inoculado em camundongos via intra-muscular, em duas doses, nos dias 0 e 21. Os animais que receberam a vacina de DNA contendo o faeC associado a seqüência de Kozak apresentaram soroconversões significativamente maiores (p<0,05) que os vacinados com pcDNA3/faeC sem a seqüência de Kozak.

The neonatal diarrhea in swine caused by enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) is responsible for high mortality and low growth rate in pigs and it is mainly dependent on the capacity of E. coli to attach to the surface of the small intestine, a property mediated by fimbria. In this study the faeC gene, which codes for the minor fimbrial subunit of E. coli K88ab, was cloned in the eukaryotic expression vector pcDNA3, associated or not to the Kozak sequence. Plasmid DNA of the two versions of the vaccine candidate was inoculated in mice by the intramuscular route, in two doses, at 0 and 21 days. The animals that received the DNA vaccine containing faeC associated to the Kozak sequence presented seroconversion significantly higher (P<0.05) than the one vaccinated with pcDNA3/faeC without the Kozak sequence.

Foram obtidos dois hibridomas secretores de anticorpos monoclonais (MAbs) que reagem com uma lipoproteína (LipL32) da membrana externa de leptospiras patogênicas. Para a produção dos hibridomas, células do baço de camundongos BALB/c, imunizados com LipL32 recombinante (rLipL32), foram fusionadas com células SP2/O-Ag14, selecionadas em meio HAT e testadas em ELISA indireto. Um dos MAbs secretados pelos hibridomas é do isotipo IgG2b e o outro do isotipo IgM. A especificidade dos MAbs foi confirmada em ELISA indireto e immunoblotting usando rLipL32 purificada, Escherichia coli (E. coli) expressando LipL32 e sorovares patogênicos e saprófitas. Os dois MAbs reagiram com a maioria dos sorovares patogênicos e não reagiram com sorovares saprófitas. Os MAbs possuem potencial para uso em testes de diagnóstico de leptospirose.

Two hybridomas secreting monoclonal antibodies (MAbs) that react with a lipoprotein (LipL32) of the outer membrane of pathogenic Leptospira were obtained. For hybridoma production, spleen cells from BALB/c mice imunized with recombinant LipL32 (rLipL32) were fused to SP2/O-Ag14 cells, selected in HAT medium and screened in an indirect ELISA. One MAb produced was of the IgG2b isotype and the other was an IgM. MAbs specificity was confirmed by indirect ELISA and immunoblotting using purified rLipL32 and whole-cell antigen preparations from Escherichia coli (E. coli) expressing LipL32 and from pathogenic and non-pathogenic serovars. Both Mabs reacted with most of the pathogenic serovars tested and none reacted with non-pathogenic Leptospira. The MAbs described have potential for use in diagnostic tests for leptospirosis.

A Pneumonia Micoplásmica é a doença respiratória mais importante dos suínos. A forma mais eficaz de controlá-la é mediante a utilização de vacinas (bacterinas), cujo custo de produção é elevado. Uma nova alternativa para o controle desta doença, baseada em uma vacina de subunidade recombinante contendo a região R1 da adesina P97 de Mycoplasma hyopneumoniae fusionada a subunidade B da enterotoxina termolábel de Escherichia coli (rLTB-R1), foi o alvo deste trabalho. Nele abordou-se a amplificação dos genes, a fusão genética entre as seqüências codificadoras para LTB e R1, a clonagem, a construção do vetor de expressão, assim como a expressão em E. coli e purificação da rLTBR1.

Mycoplasmal pneumoniae is the main respiratory disease in swine. The most efficient way to control it is through the use of vaccines (bacterins), whose production cost is high. The objective of this work was to develop a new alternative for controlling Swine Mycoplasmal Pneumoniae, based on a recombinant subunit vaccine containing the R1 region of P97 adhesin of Mycoplasma hyopneumoniae fused to the B subunit of the heat-labile enterotoxin of Escherichia coli (rLTB-R1). In this work we report the amplification of the genes, genetic fusion between LTB and R1 coding sequences, cloning, construction of the expression vector, as well as expression and purification of rLTB-R1 in E. coli.

A leptospirose constitui um problema sanitário de importância mundial. Esta doença caracteriza-se por apresentar sintomas muito parecidos com os de outras doenças como a dengue e a gripe e, clinicamente é difícil de distingui-las. Técnicas de diagnóstico da leptospirose atualmente disponíveis apresentam baixa sensibilidade e ou especificidade. Por isso, tem havido um grande esforço no sentido de desenvolver testes rápidos e eficientes, baseados em técnicas de biologia molecular. Este trabalho objetivou a avaliação e otimização do Nested-PCR, para o diagnóstico de leptospirose. Para isso foi desenhado um par de primers que amplifica uma região de 264 pb do gene LipL32. A sensibilidade e especificidade do teste foram avaliadas utilizando 7 sorovares saprófitas e 35 sorovares patogênicos. Este PCR mostrou-se específico para leptospiras patogênicas, porém a sensibilidade não foi muito alta. Com o objetivo de melhorar a sensibilidade do teste , foi desenhado outro par de primers que amplifica uma região de 183 pb do gene LipL32, interna a de 264 pb para a realização do Nested-PCR. Nesta reação foi utilizado como DNA molde o produto da primeira amplificação. O Nested-PCR mostrou-se mais sensível que o PCR normal, pois foi capaz de detectar um baixo número de células bacterianas.

Leptospirosis is a worldwide sanitary problem. Its clinical signs resemble that of other diseases like Dengue and Flu, and it is difficult to distinguish between them. Currently available diagnostic methods shown low sensitivity and specificity. Efforts have been made to develop simpler, faster and more efficient diagnostic methods. The aim of this work was to evaluate and optimize a Nested-PCR method for diagnosis of leptospirosis. Primers were designed to amplify a 264 bp region within the LipL32 gene. The sensitivity and specificity of the assay was evaluated using seven saprophytic serovars and 35 pathogenic serovars. This technique showed to be very specific for pathogenic serovars, however it lacked sensitivity. In order to enhance the sensitivity, another primer pair was designed which amplify a 183 bp region within the 264 bp region in lipL32 gene, and used in a Nested-PCR assay. This approach was much more sensitive than traditional PCR.

Comunicam-se algumas características de cultivo e a produção de plasmídios por Escherichia coli JM109 transformada com pCB01, um plasmídio que codifica os genes da adesina fimbrial de E. coli K88ab e de resistência à ampicilina. A cepa foi cultivada em Infuso de Cérebro e Coração (BHI) e em caldo de Luria (LB), em Erlenmeyers agitados e em fermentador de bancada. A taxa de perda de plasmídios foi estimada pela diferença de contagens em meio com e sem ampicilina. Os rendimentos de plasmídios das culturas em Erlenmeyer variaram de 0,9 a 67 µg/ml de meio, entanto as cultivadas em fermentador alcançaram 62 µg/ml após 8 horas de cultivo. Células sem plasmídio superaram às transformadas de 5 a 1,2 vezes durante o cultivo. Os tempos de geração da população total e das células transformadas foram 33 e 61 minutos no fermentador, e 36 e 121 minutos em Erlenmeyers, respectivamente. O mesmo inoculo produziu 62 e 33 µg de plasmídio por ml de meio no fermentador e em Erlenmeyers, respectivamente. As concentrações de bactérias e o rendimento de plasmídios foram superiores em BHI que em LB. O rendimento de plasmídios obtidos do mesmo cultivo foram 1,7 vezes maiores quando a purificação foi feita pelo método de ultracentrifugação em gradientes de césio-brometo de etídio do que com colunas comerciais.

Growth characteristics and plasmid yields of Escherichia coli JM109 transformed with pCB01, a plasmid that encodes genes for the fimbrial adhesin of E. coli K88ab and for ampicillin resistance, grown in two culture media in agitated flasks and in fermentor, are reported. The rate of plasmid loss during growth was estimated by the differential counts in media with and without ampicillin. Plasmid yields of cultures grown in flasks varied from 0.9 to 67 µg/ml of medium, while those grown in fermentor attained 62 µg/ml of medium after 8 hours of culture. Plasmid bearing cells were outgrown by plasmid free cells in proportions varying from 5 to 1.2 non-transformed for each transformed cell during growth. Generation times of total population and plasmid bearing cells were 33 and 61 minutes, and 36 and 121 minutes, for fermentor and flask grown cultures, respectively. The same culture grown in fermentor and in flasks produced 62 and 33 µg of plasmid DNA per ml of medium, respectively. Bacterial concentrations and plasmid yields were higher in BHI than in LB medium. Yields of plasmid DNA obtained from the same batch were 1,7 times higher with cesium chloride-ethidium bromide gradients than with commercial columns.

O gene do estresse suíno (gene hal), em homozigose recessiva (nn), está associado com a ocorrência da Síndrome do Estresse Porcino (PSS) e com a ocorrência da carne pálida, mole e exudativa (PSE). Em heterozigose (Nn), está relacionado com diminuição na qualidade da carne porém, com maior peso de carcaça. Neste estudo, foi caracterizado o genótipo do gene hal de 160 suínos por meio de análise do DNA extraído de um único folículo piloso. Estes animais foram abatidos e, após, mensuradas características de carcaça de cada um. Entre os 160 animais analisados, 82 (52,58%) foram caracterizados como NN, 67 (41,80%) como Nn e nove (5,62%) como nn. A variação das características de carcaça entre os genótipos foi avaliada por análise de variância, usando o SAS. Os animais dos três genótipos não diferiram quanto ao peso da carcaça quente, à espessura de toucinho, profundidade de músculo, porcentagem de carne magra e cor do músculo longissimus dorsi. Entretanto, a variação da cor ao longo da carcaça foi menor em animais NN (40,82%) do que em Nn (49,77%) e nn (53,83%). Estes resultados indicam que a presença do gene hal tanto em heterozigose como em homozigose recessiva não está associada ao maior peso de carcaça e a utilização destes animais pode acarretar em perda na qualidade da carne. Devido a isto, o uso intencional de animais homozigotos recessivos ou heterozigotos em programas de cruzamento deve ser desestimulado.

The swine stress gene (hal gene) in recessive homozygosis (nn) is associated with the occurrence of the Porcine Stress Syndrome (PSS) and with the occurrence of pale, soft and exudative pork (PSE). In heterozygosis (Nn) it is related to low quality of carcass, but higher carcass weight. This study has characterized the genotype of hal gene by DNA-testing, obtained by alkaline extraction from a single hair root, in a sample of 160 swines. These animals were slaughtered and carcass traits for each animal were measured. Among the 160 animals, 82 (52.58%) were identified as NN, 67 (41.80%) as Nn, and 9 (5.62%) as nn. Variation in carcass traits across genotypes was evaluated by analysis of variance, using SAS. The NN, Nn and nn animals did not differ for: hot carcass weight, backfat thickness, muscle depth, lean meat percentage, and longissimus dorsi muscle color. However, variation in carcass color was lower for NN (40.82%) than for Nn (49.77%) and nn (53.83%) animals. These results indicate that the presence of hal gene in heterozygosis or recessive homozigosis was not associated with better carcass weight and the utilization of these animals may lead to lower carcass quality. Therefore, the intentional use of heterozygous and recessive homozygous animals should not be encouraged.